牛大力种苗繁殖技术

昌明

<h3>牛大力为多年生宿根性植物,可自然过冬,第二年萌发出新的苗芽继续生长。</h3> <h3>人工种植牛大力经济效益显著,发展前景很好,利用荒山草坡种植牛大力,牛大力管理粗放,技术要求低,种3-5年后可收,广东省地区现阶段人工种植牛大力还处于小部份人试探性、试验性种植,以茂名、台山地区种植较多。</h3> <h3>一,牛大力的根茎叶花果</h3> <h3>二,牛大力的繁殖方法</h3> <h3>(一)种原选择</h3><h3>种植牛大力种源时,对牛大力种源分三年期严格优选,优选方法为:</h3><h3>第一年:种植时无小牛的淘汰,6个月后生长慢,生长差的淘汰,</h3><h3>第二年,对种植种源进行表层侧挖,牛小的,牛生长不均衡的淘汰,</h3><h3>第三年,种源繁殖出种子试播种,种苗不好的,种源淘汰。</h3> <h3>(二)繁殖方式</h3> <h3>1、种子苗:牛大力种子苗是种子发芽形成的,一般只有一条主根,主根被截断后,发出的细根不易膨大形成薯,种苗性状分高,不整齐,产量不保证。而且开叉多,生长慢,产量低,品质差,且种植两年以上的植株才会开花结子,而用于开花结子的植株,其地下薯块品质相对很差,一般实生苗需4~5年才形成产量。<br></h3><h3>2、组培苗:牛大力组培苗是批量化生产而成,生长整齐,性状优良,根系数量较多,均能膨大成薯。</h3><h3>3、扦插苗:牛大力苗种中扦插苗存在的优势比较大,扦插苗枝条采集比种子相对容易简便且能保持母本的优良性状,有效成分含量高,比实生苗形成产量快、结薯多、品质好,一般1~2年就能形成产量,优势很是明显。</h3><h3><br></h3><h3></h3> <h3>目前,牛大力种植面积约3万亩,按每亩种600株苗计,需要1800万株幼苗。由于牛大力的花期和果期均较长,同批采收的种子成熟度不一致,导致牛大力种子发芽极不整齐,有一个月内发芽的,也有半年后发芽的,且发芽率较低,平均在42.5-61.25%之间。</h3><h3><br></h3><h3>与牛大力组培苗和扦插苗相比,用牛大力种子繁殖的种苗,生长快速、种植头一年直径已有手指大,即形成膨大的主块根(薯块),种子繁殖苗是人工种植牛大力的最佳选择。但目前市面上牛大力种子育苗都是小规模进行,加上种子发芽率低和发芽不整齐,难以满足市场的大规模需求。</h3> <h3>三,组织培养繁殖种苗</h3> <h3>利用牛大力的器官如根、茎、叶、茎尖、花、果实等)组织(如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等)或细胞(如大孢子、小孢子、体细胞等)以及原生质体,在无菌和适宜的人工培养基及光照、温度等人工条件下,能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根,最后组培出有根有叶的牛大力组培苗,牛大力组培方法可大规模大面积工厂化繁殖牛大力苗。</h3> <h3>(一)牛大力芽的组织培养方法</h3><h3>1.外植体</h3><h3>以野生 牛大力的鲜嫩顶芽、腋芽为外植体</h3><h3>2.消毒</h3><h3>对外植体用75%酒精和0.1%氯化汞溶液 进行消毒灭菌</h3><h3>3.芽的诱导</h3><h3>芽诱导培养基配方为 MS+6-BA0.4mg.L-1+IBA0.2mg.L-1+3%白砂糖+0.35%琼脂</h3><h3>4.继代培养</h3><h3>芽继代增殖培养基配 方为MS+6-BA0.6mg.L-1+NAA0.5mg.L-1+3%白砂糖+0.35%琼脂,</h3><h3>5.生根培养</h3><h3>生根培养基配方为1/2MS+ABT10.8mg.L-1+IBA0.4mg.L-1+3%白砂糖+0.35%琼脂,</h3><h3>6.练苗移栽</h3><h3>待瓶苗高度长 至2cm左右时,再将瓶苗移栽到大棚苗床培育至20cm以上即为牛大力种苗成苗。</h3> <h3>(二)牛大力茎段组织培养方法</h3><h3>此文提供牛大力种子直接诱导丛芽并快速繁育种苗的方法,该方法可实现牛大力种子规模化育苗,一次可育苗几十万株到几百万株,幼苗整齐,种子发芽率在97%以上,成活率在98%以上,育苗总成功率在95%以上,育苗时间可提前1-2个月。<br></h3><h3>以下是牛大力种子直接诱导丛芽并快速繁育种苗的方法:</h3><h3>(1)初代培养</h3><h3>剪取牛大力半木质化茎条,去掉叶片,剪成3-5cm的长茎段,用水冲洗干净,超声波灭菌7-10min后,用无菌水冲洗5-6次,剪除两端切口,剪成1-1.5em长的带芽茎段,接种到初代培养基,暗培养7-8d后,腋芽萌动,再弱光培养25d,腋芽长到1cm,转移至强光下进行培养30d,腋芽长成1.5-3cm长的单一芽苗,无叶片分化。</h3><h3>(2)芽增殖培养</h3><h3>将初代培养长成的芽苗茎剪成1.5-2cm的长茎段横放接入到从芽增殖培养基,经过28d的培养,从每个茎段腋芽处萌发5-7个丛生芽,待小芽长至3-6cm,逐渐分化出1-3片复叶。</h3><h3>(3)壮苗培养</h3><h3>剪取高约4cm,有2片复叶的芽苗单株竖放转接到壮苗培养基,弱光下培养5-6d,转移至强光下培养;培养16-20d,苗高4-5cm,叶片浓绿,茎木质化程度高,生长旺盛。</h3><h3>(4)瓶外快速繁殖</h3><h3>培养移栽基质按黄心土∶河沙∶泥炭土(10-15∶1∶1)的比例拌匀,用8cm×12cm营养袋装好备用;移栽前一天用0.1%-0.2%高锰酸钾溶液进行消毒,移栽时用清水把基质淋透;移栽前,将瓶内壮苗用清水洗净基部培养基,再置于500mg/L ABT生根粉中浸蘸约1min,扦插在营养袋基质中,立即搭小拱棚覆盖塑料薄膜及黑网,保持苗床温、湿度,棚内相对湿度保持在90%以上,温度控制在30℃以下,移栽1周后,可揭开部分薄膜透气,以后揭开薄膜的面积可逐渐加大,每间隔7d喷施1次杀菌剂及叶面肥,移栽40d出主根2条,生根率达75%-85%;90d后生根苗高达10cm,主根1-4条,多数为2条,粗度达0.15cm,根长最长可达15cm,须根10-20条;180d后,主根膨大成圆柱状或两个纺锤体连成一串,膨大处直径达0.8-1.3cm。</h3><h3><br></h3><h3>(5)培养基及培养条件</h3><h3>MS培养基加蔗糖3%,pH值5.6-5.8,培养温度(26±1)℃,光照时间12h/d,光照强度400-20001x;所述初代培养基中添加有激素。</h3><h3><br></h3> <h3>(三)利用试管微扦插快速繁殖牛大力种苗的方法</h3><h3>1)无菌苗的获得</h3><h3>选取牛大力的荚果经消毒后将种子剥出,将种子接种到发芽培养基进行培养至长成幼苗,培养温度度为25~28℃,光照强度为15~20μmol·m-2·s-1,光照时间为8h·d-1,培养40~60天;所述发芽培养基是以MS培养基为基本培养基并附加6-苄基腺嘌呤0.5mg·L-1、α-萘乙酸0.1mg·L-1。</h3><h3><br></h3><h3>2) 茎段微扦插</h3><h3>将步骤1所获得的幼苗切成带1~2节的茎段,将茎段的基部向下插入微扦插培养基中进行培养至长出侧芽,再将侧芽切成带1~2节的茎段,然后将其基部向下插入新鲜的微扦插培养基中进行培养,培养温度度为27~29℃,光照强度为30~40μmol·m-2·s-1,光照时间为8h·d-1;所述微扦插培养基是以MS培养基为基本培养基并附加6-苄基腺嘌呤2.0mg·L-1、吲哚乙酸0.1mg·L-1。</h3><h3><br></h3><h3>3)茎段生根<br></h3><h3>将步骤2所获得的侧芽切成带1~2节的茎段,并将其接种到生根培养基上,先暗培养8~13天再进行光照培养20~30天,至茎段生根即可获得牛大力种苗。所述生根培养基是以1/2MS培养基为基本培养基并附加蛋白胨1.0g·L-1、IAA0.8mg·L-1、IBA0.5mg·L-1、生物素0.5mg·L-1。</h3> <h3>(四)牛大力种子为外植体组织培养</h3><h3>1.诱导培养基MS+6-BA 0.4 mg/L+NAA 0.2 mg/L</h3><h3>种子无菌发芽率分别为98.23%、92.13%和95.01%;</h3><h3>以改良MS+6-BA 0.6 mg/L+IBA 0.3 mg/L+KT 0.2 mg/L为继代增殖培养基,添加半胱氨酸8 mg/L,FeSO4·7H2O加至MS用量的1.2倍,增殖系数分别达5.57、3.20、5.30;</h3><h3>2.生根培养基以1/2MS+NAA 1.0 mg/L+IBA 1.5 mg/L、1/2MS+NAA 1.0 mg/L+IBA 3.0 mg/L、1/2MS+NAA 1.5 mg/L+IBA 1.0 mg/L。生根率分别达78.00%、67.33%、70.33%;</h3><h3>3.移栽</h3><h3>生根苗移栽在V黄心土∶V细河沙∶V泥炭土=8∶1∶1基质中培育60 d后,成活率分别达94.00%、85.43%和89.97%。</h3> <h3>激素浓度与增值系数</h3> <h3>(五)牛大力实生苗播种繁殖方法</h3><h3><br></h3><h3>1、采集充分成熟的荚果,干燥,及时拣出开裂的荚果和脱壳的种子,未开裂的荚果,用钳子轻轻夹开,取出种子。</h3><h3><br></h3><h3>2、选择饱满、成熟、无机械损伤、无病虫害的种子。</h3><h3><br></h3><h3>3、新鲜的种子在45℃的温水中浸泡4小时。</h3><h3><br></h3><h3>4、取适宜大小的托盘,用清水洗净;将与托盘规格相同的纱布块置于开水中煮5min,取出晾凉;将4层湿纱布铺于托盘底部,将牛大力种子均匀单层平铺在纱布上,铺满整个托盘,上部用4层湿纱布盖住种子。</h3><h3><br></h3><h3>5、将铺好种子的托盘置于培养箱或人工气候箱内,培养条件:温度40℃,湿度85%。</h3><h3><br></h3><h3>6、每天将上、下层纱布用清水冲洗干净,每3天清洗一次培养的种子,并拣出腐烂的种子,完好的种子用干净清水冲洗3次至种子表面无黏滑感,继续按照步骤(4)和(5)进行培养,收集萌芽的种子[吉山花瑶]。</h3><h3><br></h3><h3>7、将碎椰糠在强光下晒干,与碎耕作土按照体积比1:2混合均匀,每立方混合物添加国标有机肥80kg,充分混匀,做成育苗基质;将育苗基质装入高 10cm,直径15cm的育苗容器中,将育苗容器整齐摆放在苗圃内。</h3><h3><br></h3><h3>8、在育苗基质上打深2cm的小洞,芽朝下将种子放于洞中,上部覆盖基质,厚度1cm,浇透水。</h3><h3><br></h3><h3>9、畦面搭设高50cm的塑料小拱棚,四周压实;最高环境温度≤20℃时,将已播种的育苗容器放置在塑料小拱棚内,最高环境温度&gt;25℃时揭去塑料小拱棚;整个育苗过程控制湿度在80%。</h3><h3><br></h3><h3>10、苗高11cm时每12天喷施一次0 .1%的复合肥水溶液;苗高35cm时,进行修剪主茎至高12cm,并剪去侧枝,苗期修剪2次;培育6个月后即可出圃。</h3> <h3>(四)无性繁殖</h3><h3> 1)前期准备过程,选取牛大力枝条修剪成茎段,备用,将河沙与椰糠按比例混合均匀得到基质,备用;2)后期管理过程,将牛大力茎段的基部蘸生根剂后扦插到基质中,淋水促使茎段基部与基质紧密接触;扦插后遮阴培养,并保持基质水分和空气湿度,待茎段生根后采用尿素溶液进行淋肥至种苗长成。</h3> <h3>广东中科农业科技有限公司主要从事药用植物,名优水果和花卉种苗的研发,生产,销售,基地建设,技术培训和技术服务。本公司的植物组织培养工厂位于中国科学院华南植物园科研区,始创于1986年,是我国最早的植物组织培养产业化基地之一。</h3><h3>公司网址: http://www.gdzkny.com/</h3><h3>联系方式:13632342468</h3><h3>联系人:周甸斌</h3><h3>广州科普作家协会</h3><h3>广东中科农业科技有限公司</h3> <h3>牛大力组织培养文献检索</h3><h3>一、牛大力组培技术专利</h3><h3>[01] 杨辉增. 一种牛大力高产栽培方法 [P]. 中国专利:CN107125134A,2017-09-05.</h3><h3> [02] 杨辉增. 一种牛大力抗病毒组织培养基及其制备方法 [P]. 中国专利:CN107047309A,2017-08-18. </h3><h3>[03] 杨辉增. 一种牛大力抗菌组织培养基及其制备方法 [P]. 中国专利:CN106962199A,2017-07-21.</h3><h3> [04] 杨辉增. 一种牛大力诱导组织培养基及其制备方法 [P]. 中国专利:CN106942064A,2017-07-14. </h3><h3>[05] 杨辉增. 一种牛大力壮苗组织培养基及其制备方法 [P]. 中国专利:CN106962200A,2017-07-21.</h3><h3> 申请机构/个人其它专利</h3><h3>[01] 杨辉增. 一种牛大力高产栽培方法 [P]. 中国专利:CN107125134A,2017-09-05.</h3><h3> [02] 杨辉增. 一种牛大力抗病毒组织培养基及其制备方法 [P]. 中国专利:CN107047309A,2017-08-18.</h3><h3> [03] 杨辉增. 一种牛大力抗菌组织培养基及其制备方法 [P]. 中国专利:CN106962199A,2017-07-21. </h3><h3>[04] 杨辉增. 一种牛大力诱导组织培养基及其制备方法 [P]. 中国专利:CN106942064A,2017-07-14.</h3><h3> [05] 杨辉增. 一种牛大力壮苗组织培养基及其制备方法 [P]. 中国专利:CN106962200A,2017-07-21. </h3><h3>相似专利</h3><h3>[01] 黄妹兰. 一种牛大力的培育方法 [P]. 中国专利:CN107455259A,2017-12-12. [</h3><h3>02] 姚绍嫦;白隆华;蓝祖栽;翟勇进;黄浩;韦荣昌. 牛大力悬浮细胞培养的快速繁殖方法 [P]. 中国专利:CN106386511A,2017-02-15. </h3><h3>[03] 李志英;黄碧兰;徐立. 一种以牛大力花药为外植体的再生方法 [P]. 中国专利:CN106613991A,2017-05-10. </h3><h3>[04] 杨辉增. 一种牛大力壮苗组织培养基及其制备方法 [P]. 中国专利:CN106962200A,2017-07-21. </h3><h3>[05] 杨辉增. 一种牛大力诱导组织培养基及其制备方法 [P]. 中国专利:CN106942064A,2017-07-14. </h3><h3>[06] 杨辉增. 一种牛大力抗菌组织培养基及其制备方法 [P]. 中国专利:CN106962199A,2017-07-21. </h3><h3>[07] 杨辉增. 一种牛大力抗病毒组织培养基及其制备方法 [P]. 中国专利:CN107047309A,2017-08-18. </h3><h3>[08] 杨辉增. 一种牛大力高产栽培方法 [P]. 中国专利:CN107125134A,2017-09-05. </h3><h3>[09] 冯志祥;张桂琴;黄雪娟. 牛大力种苗组织培养快速繁殖及育苗的方法 [P]. 中国专利:CN102893870A,2013-01-30. </h3><h3>姚绍嫦;白隆华;马小军. 一种牛大力种子直接诱导丛生芽并快速繁育种苗的方法 [P]. 中国专利:CN103039361A,2013-04-17. </h3><h3><br></h3><h3>牛大力组培论文</h3><h3>[1]时群,陈丽文,陈乃明,何贵整,杨利平,梁刚,蔡林.牛大力种子组培快繁技术研究[J].安徽农业科学,2016,4421:138-141.</h3><h3>[2]姚绍嫦,白隆华,蓝祖栽,凌征柱.牛大力毛状根生长及培养液中碳源、氮源与磷源利用研究</h3><h3>[2]姚绍嫦,白隆华,蓝祖栽,凌征柱.牛大力毛状根生长及培养液中碳源、氮源与磷源利用研究[J].现代中药研究与实践,2016,3004:1-5.</h3><h3>[3]陈石,杨兴玉,陈秀龙,李静,林希昊,马帅鹏.牛大力外植体灭菌和增殖培养研究[J].中国园艺文摘,2015,3112:17-18+150.</h3><h3>[4]张桂琴,黄雪娟.牛大力茎段组织培养污染率控制方法的初步研究[J].北京农业,2015,18:65.</h3><h3>[5]韦莹,马小军,董青松,韦坤华,李翠,白隆华.牛大力离体培养与植株再生条件的优化[J].湖北农业科学,2012,5123:5499-5502.</h3><h3>[6]潘颖南,张向军,蒙平,庾韦花,陈少珍,唐军,黄素梅,邹瑜.药用植物牛大力组织培养初探[J].广西农业科学,2010,4106:523-525.</h3><h3>[7]时群,韦大器,陈丽文,陈乃明,何贵整.牛大力组织培养瓶内复壮瓶外生根快繁技术[J].林业实用技术,2009,12:30.</h3><h3>[8]黄碧兰,徐立,李志英,马千全,李克烈,陈伟.牛大力茎段组织培养技术研究[J].安徽农业科学,2008,3632:13993-13994.</h3><h3>[9]时群,韦大器,陈丽文,朱开昕.牛大力茎段组织培养污染率控制方法的初步研究[J].广西中医学院学报,2007,03:63-65.[</h3><h3>10]王祝年,李志英,徐立,黄碧兰.牛大力的组织培养和快速繁殖[J].植物生理学通讯,2005,06:800.</h3>